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文章詳情

動(dòng)物細(xì)胞融合的方法

日期:2025-07-10 02:16
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摘要:

 

在體外培養(yǎng)條件下,動(dòng)物細(xì)胞會(huì)自發(fā)融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合效應(yīng)的生物或化學(xué)藥劑,或者采用電融合技術(shù),人為地促進(jìn)細(xì)胞融合。

病毒誘導(dǎo)融合 病毒是*早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的病毒有仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺(tái)病毒*常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。
用滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的
優(yōu)點(diǎn):融合率較高,對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適宜,且仙臺(tái)病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養(yǎng);

缺點(diǎn):仙臺(tái)病毒不穩(wěn)定,在保存過(guò)程中融合活性會(huì)降低,并且制備過(guò)程比較煩瑣。此外,病毒引進(jìn)細(xì)胞后,可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生命活動(dòng)產(chǎn)生干擾。

聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合 聚乙二醇PEG具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,能夠有效地促進(jìn)植物原生質(zhì)體和動(dòng)物細(xì)胞的融合。在不同種類的動(dòng)物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇,就會(huì)發(fā)生細(xì)胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過(guò)程中,就會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合。聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理,目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑,使用起來(lái)很方便,誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率比較高,但是它有一定毒性,對(duì)有些細(xì)胞(如卵細(xì)胞)不適用。

細(xì)胞融合法 20世紀(jì)80年代建立起來(lái)的細(xì)胞融合技術(shù),是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場(chǎng)中,使細(xì)胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,以促使細(xì)胞融合。緊密排列的細(xì)胞,在相互接觸的細(xì)胞膜之間會(huì)出現(xiàn)無(wú)蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū),當(dāng)受到電擊時(shí),這個(gè)區(qū)域就會(huì)被擊穿,產(chǎn)生脂雙層膜孔,導(dǎo)致細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)連通,進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞融合。細(xì)胞融合技術(shù)有許多優(yōu)點(diǎn),如導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率高,對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用,操作簡(jiǎn)便,可重復(fù)性好。
 

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